Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
# Допускается использование пластинок, приготовленных в промышленных условиях, если они отвечают требованиям раздела 4.1.1. «Реактивы», а также выдерживают испытание «Проверка пригодности хроматографической системы», описанное в частной статье. Рекомендуется каждую партию получаемых пластинок, приготовленных в промышленных условиях, проверять на близость величин Rf.
# Близость величин R. Испытания проводят не менее чем на трех пластинках испытуемой партии. Для этого используют методику проверки хроматографической разделяющей способности, указанной в разделе 4.1.1. «Реактивы» («ТСХ пластинка с слоем силикагеля»). На линию старта каждой пластинки наносят по 5 пятен раствора для проверки пригодности ТСХ пластинок Р, хроматографируют и рассчитывают величины Rf красителей для каждого нанесения. В пределах каждой пластинки наибольшая разница величин Rf среди разных нанесений для каждого красителя не должна превышать 0.02. В противном случае такие пластинки не рекомендуется использовать для фармакопейного анализа.
Предварительная подготовка пластинок. В некоторых случаях может понадобиться промывка пластинок перед хроматографированием, которая может быть выполнена посредством предварительного элюирования чистых пластинок подходящим растворителем. Пластинки могут быть также импрегнированы (пропитаны) посредством таких процедур, как элюирование, погружение или опрыскивание. Перед использованием пластинки активируют, если необходимо, посредством нагревания в термостате при температуре от 100оС до 105оС в течение 1 часа.
# Допускаются другие условия активации пластинок, описанные в частных статьях.
Хроматографическая камера представляет собой емкость с плотно подогнанной крышкой и с плоским дном или дном с двумя желобами из инертного прозрачного материала, соответствующими по размеру используемым пластинкам. Для горизонтального элюирования хроматографическая камера имеет желоб для подвижной фазы и дополнительно содержит устройство для подачи подвижной фазы к неподвижной фазе.
# В необходимых условиях допускается использование хроматографических камер других типов с описанием их в частных статьях.
Микропипетки, микрошприцы, калиброванные капилляры или другие устройства, пригодные для нанесения растворов.
Устройство для обнаружения или тушения флуоресценции.
Проявляющие реактивы - для обнаружения разделенных веществ посредством опрыскивания, обработки парами или погружения.
МЕТОДИКА
# Если нет других указаний в частной статье, хроматографическое разделение выполняют восходящим способом в насыщенной атмосфере.
# Предпочтительнее использовать такие подвижные фазы, которые обеспечивают величины Rf испытуемых соединений в пределах от 0,3 до 0,7.
Вертикальное элюирование. Стенки хроматографической камеры выстилают фильтровальной бумагой. Подвижную фазу наливают в камеру в количестве, достаточном для того, чтобы после смачивания фильтровальной бумаги покрыть дно камеры слоем жидкости, необходимым для хроматографирования. Для насыщения хроматографическую камеру с подвижной фазой закрывают крышкой и выдерживают в течение 1 часа при температуре от 20оС до 25оС.
# Слой жидкости в хроматографической камере должен быть таким, чтобы после помещения в него пластинки пятна или полосы находились над уровнем жидкости.
Объемы растворов анализируемых веществ, указанные в частной статье, наносят небольшими порциями, получая полосы или круглые пятна на подходящем расстоянии от нижнего края и от боковых краев пластинки. Растворы наносят на линию, параллельную нижнему краю пластинки, с расстоянием не менее 10 мм между пробами.
# Если нет других указаний в частной статье, пятна или полосы наносят на расстоянии не менее 15 мм от нижнего края и не менее 10 мм от боковых краев пластинки.
После испарения растворителей из нанесенных проб пластинку помещают в хроматографическую камеру как можно более вертикально, следя за тем, чтобы пятна или полосы находились выше поверхности подвижной фазы. Камеру закрывают, оставляют ее при температуре от 20оС до 25оС в защищенном от прямых солнечных лучей месте. После того как подвижная фаза пройдет расстояние, указанное в частной статье, пластнику вынимают, сушат и обнаруживают пятна способом, указанным в частной статье.
В случае двухмерной хроматографии после первого хроматографирования пластинку сушат и выполняют второе хроматографирование в направлении, перпендикулярном первому.
Горизонтальное элюирование. Объемы растворов анализируемых веществ, указанные в частной статье, наносят небольшими порциями, получая круглые пятна (от 1 мм до 2 мм в диаметре) или полосы (длиной от 5 мм до 10 мм и шириной от 1 мм до 2 мм) на подходящем расстоянии от нижнего края и от боковых краев пластинки (# если нет других указаний в частной статье, пятна или полосы наносят на расстоянии не менее 15 мм от нижнего края и не менее 10 мм от боковых краев пластинки). Растворы наносят на линию, параллельную нижнему краю пластинки, с интервалом не менее 5 мм между нанесенными пробами.
